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兔elisa檢測試劑盒的操作可分為以下九個步驟

發(fā)布時間:2020-11-26   點擊次數(shù):1628次
  兔elisa檢測試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。兔elisa檢測試劑盒適用于體外定性檢測雞血清中的抗體ELISA檢測。
 
  兔elisa檢測試劑盒的基本原理:
  1、抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學活性;
  2、抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,仍保持其免疫學和酶學活性;
  3、酶結(jié)合物與相應抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
 

  性能特點:
  1、準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900;
  2、靈敏度:zui低檢測濃度小于;
  3、特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應;
  4、重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%;
  5、貯藏:2-8℃,避光防潮保存;
  6、有效期:6個月。
 
  兔elisa檢測試劑盒的操作步驟:
  1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
  2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
  3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
  4、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  6、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。
  9、在450nm波長處測定各孔的OD值。
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