上海仁捷生物人Tau蛋白（Tau）ELISA試劑盒的靈敏度怎么樣？

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人Tau蛋白（Tau）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人Tau蛋白（Tau）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒性能

1.  檢測范圍：75 pg/mL – 2400 pg/mL。

2.  靈敏度：檢測濃度小于10 pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

實驗結(jié)果計算

以所標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

而配對抗體作為核心試劑，是實驗的關(guān)鍵因素，是真正意義上的CP。并非所有抗體都能應(yīng)用于ELISA應(yīng)用，必須對單個抗體進(jìn)行評估。首要關(guān)注抗體識別的免疫原區(qū)域輔助抗體對的選擇。對于雙抗夾心法CP選擇有竅門，其中一個抗體作為捕獲抗體包被在多孔板表面，固定抗原。另一個則被偶聯(lián)，用于抗原的檢測。兩個抗體必須與同一抗原不同表位發(fā)生反應(yīng)。即如果抗原通過捕獲抗體固定在平板上，那么檢測抗體必須能夠與其他表位相互作用，而不會受到捕獲抗體或平板的位阻。目前市面上也有很多供應(yīng)商提供驗證過夾心法ELISA的抗體對，可以依據(jù)實際情況選擇。